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细胞培养 | 细胞房的构建及常用设备入门攻略,一文全部掌握!

2021.08.26

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 细胞培养是进行细胞生物学研究时最基础的实验,是将离体的组织细胞置于模拟在体内生存的环境中,让其生长和发育的方法。现代生物技术(基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术等)的发展与细胞培养有着紧密联系,然而细胞培养对无菌等条件的要求高于普通的微生物培养,实验习惯和操作要求也有不同的标准,因此细胞房(细胞培养室)在建设时须要遵守一定的基本原则。

 

01细胞房的构建
在细胞房内进行实验时需严格保持无菌操作,以避免微生物及其他有害因素的影响。工作环境需保持清洁、干燥和无烟尘。一般细胞房有五个工作区:无菌操作区、孵育区、制备区、清洗消毒灭菌区和储藏区。


洁净室(区)空气洁净度级别表

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1、无菌操作区:无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作,最好能与外界隔离,不能受到穿行或受其他干扰。一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。

·        更衣间:提供更换实验服、鞋子及穿戴帽子、口罩和手套。

·        缓冲间:位于更衣间与操作间之间。 目的是为了保证操作间的无菌环境,同时可放置细胞培养箱及某些必需的小型仪器。

·        无菌操作间:专用于无菌操作、细胞培养。

2、孵育区:孵育区对无菌的要求虽没有无菌区严格,但仍需保持清洁无尘。因此也应设置在干扰少且非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行。

3、制备区:主要进行培养液及有关培养用的液体制备。

4、清洗和消毒灭菌区:应与其他区域分开,主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。

5、储藏区:主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等设备。此环境同需要清洁无尘。

 

02细胞房常用设备

1、超净工作台:也称为净化工作台。不同的品牌的超净工作台工作原理大致相同,通常是将室内空气经粗过滤器初滤,然后由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤。由此送出的洁净气流以一定均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。一般使用的净化工作台主要有两种:

·        侧流式或称垂直式

·        外流式或称水平层流式。

2、显微镜:倒置显微镜是细胞房必需的日常工作常规设备,用于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。

3、超纯水机:细胞培养对水的质量要求较高。细胞培养用水一般要求双蒸水(0.8MΩ以上),纯化时可采用离子交换装置或蒸馏器。

4、单细胞悬液制备仪:可将组织制备成高活性单细胞悬液或组织匀浆。广泛应用在单细胞测序、原代细胞培养、流式分析、细胞分选、细胞治疗等研究领域。


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5CO培养箱CO培养箱是细胞培养中必不可少的设备,它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境,如适宜的温度、CO浓度和湿度等。细胞在体外培养时容易受到各种细菌、微生物的污染,因此,CO培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。RWD D180-P二氧化碳培养箱,具备高达140的高温干热灭菌系统成为大家首选设备。


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6、干燥箱:培养箱的相关器械、器皿在日常清洁中需要消毒、烘干后使用,因此细胞实验室必须配备干燥箱才行。常见的干燥箱是鼓风式电热干燥箱,其优点在于温度均匀、干燥效果较好。

7、冰箱:细胞实验室中的冰箱分为普通冰箱/冷藏柜和低温冰箱两类。其中,低温冰箱温度控制跨度在-40~-150左右,常用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂,如酶、血清以及一些动物样品等。

8、液氮罐:为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或是细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196,因此,需要液氮罐对细胞进行保藏。

9、恒温水浴:从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37水浴中快速复苏之后才传代培养,因此,恒温水浴是细胞实验室必备仪器。

10、自动细胞计数仪:细胞计数是细胞生物学研究中的一项基本实验技术,通过细胞计数仪可以精准快速地计算细胞浓度、了解培养细胞状态、绘制生长曲线等。


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11、消毒器:直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。常用高压蒸汽灭菌锅,手提式高压蒸汽消毒器。

12、器械:主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。常用的有:手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪(弯剪及直剪),眼科虹膜小剪(弯剪或直剪),血管钳及组织镊、眼科镊(弯、直)等。瑞沃德动物手术器械,质量好助力工作效率提升。


ps其他设备可参考具体实验需求。


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