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瑞沃德“拍了拍”你,把这款高效实验神器分享给你!

2020.07.03

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手动计数太麻烦?

这款神器用起来!

四大分析一安排,

细胞状况全明白!

细胞房必备计数神器,

瑞沃德C100自动细胞计数仪!

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  01-细胞计数分析

C100适用于直径在4-60μm的细胞或微粒的计数,如绝大部分细胞系、干细胞、原代细胞等。


通过参数设置中的圈门选项,可以对细胞的圆度、亮度、直径进行圈选划分,从而排除非目标细胞干扰。


算法可有效识别聚团细胞,提高计数准确度。


非台盼蓝模式下,对于已知细胞状态或不需要测定细胞活率的样本,用户可直接略过染色步骤,进行总细胞浓度的分析。

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02-细胞活力分析

台盼蓝模式下,用户可使用随机附配的0.4%的台盼蓝染料,对死细胞进行染色,从而进行活死细胞的区分,进行细胞活力(通常是以细胞活率进行表征)的检测。此时,活细胞会被绿圈标记,死细胞会被红圈标记。

1:台盼蓝染色原理是什么?


一般活细胞,细胞膜的结构完整且具有选择通透的活性。因而可易排斥台盼蓝染料,使之不能够进入胞内。而死细胞的细胞膜可能是不完整的或者细胞膜的通透性会增加,因而台盼蓝可进入到细胞内。通过这种染色法,可以有效区分活细胞和死细胞。

2:什么时候需要进行细胞计数和活力分析?


> 监测细胞生长增殖状态(绘制细胞生长曲线)

细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法,也是判定细胞活力的重要指标,是培养细胞生物学特性的基本参数之一。

一般细胞传代之后,经过短暂的悬浮然后贴壁,随后度过长短不同的潜伏期,即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后,停止生长,进入平顶期,然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化,典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期,斜率较大的指数生长期,呈平台状的平稳期和衰退期四个部分。以存活细胞数(10'000/mL)对培养时间(h或d)作图,即得生长曲线。


> 细胞传代

确定细胞传代后合适的生长密度。


> 细胞冻存、复苏过程

细胞冻存、复苏过程中测定细胞活力。冻存复苏的过程中,细胞损伤是不可避免的,细胞浓度活率计数在冻存和复苏的各个环节至关重要。例如,如果冻存前的细胞浓度或活率过低,会导致细胞复苏后生长缓慢或者无法生长。


> 细胞染色时数目确定

细胞进行抗体染色时需要根据细胞的数目确定抗体的用量。


> 使用流式细胞仪前细胞浓度确定

流式细胞仪上样前需要确认样品的细胞浓度,过浓容易堵塞机器。

03-细胞大小分析

C100自动细胞计数仪在完成计数的同时,会自动生成一个细胞直径分布直方图和计算细胞的平均直径。


在细胞研究中,细胞大小的改变是一个关键特征,通常在细胞转染、药物测试和细胞活化分析中被测定。

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04-细胞荧光分析

1)检测细胞的转染效率(GFP、RFP)

对细胞进行目的基因转染时,需要对转染效率进行评估。一般情况下,转染的质粒上有编码荧光蛋白的序列作为报告基因,因而转染成功的细胞就应该是该荧光蛋白表达阳性的。一般情况下,使用荧光显微镜或者流式细胞仪是实验室常用的转染效率分析的方法,但二者皆具有操作复杂、成本高的弊端。


利用C100的荧光分析功能,配备对应的荧光模块后,可实现对GFP、RFP等荧光蛋白表达情况的分析,并对其进行自动计数,从而快速、简单、高效地得到目的基因表达的阳性率。


2)细胞活力鉴定(AO/PI双荧光染色法)

区分细胞死活的方法,除了主流的台盼蓝染色,AO/PI双荧光染色计数法这种更精确的染色鉴定方法在一些领域如细胞治疗等高要求行业也趋于流行。




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