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实用 | 如何读懂胎牛血清的质量检测报告?

2019.10.08

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胎牛血清是许多做细胞培养相关的实验的科研机构与院校必不可缺的一项试剂。作为天然来源的血液制品,其成分是复杂的,质量是可变的。


所以,胎牛血清在生产时,应当进行严格的检测并出具检测报告书以确保验证其质量的相对稳定性。



▶ 作为使用者,你真的读懂胎牛血清的检测报告了吗?





外观观测



采血过程中的粗暴操作往往会导致血清中的血红蛋白含量过高,产生溶血现象,血清的颜色便会偏棕红。


因此,人眼目测品质优良的血清通常会偏棕黄色或是琥珀黄,澄清透明,轻摇无沉淀(沉淀通常是污染或者是血清中的变性蛋白)。


微生物检测



细胞培养过程中,对环境的要求十分严格。对于培养所使用的试剂的要求也很高。一般要求无细菌、病毒、支原体等微生物的污染。因为微生物不仅会消耗细胞培养液中的营养成分,大量繁殖时其代谢产物也会改变细胞培养环境的酸碱度、成分和渗透压等,严重时甚至会引起细胞染色体畸变,改变细胞形态等。


血清在生产的过程中会要求多次精过滤以除去其中可能存在的微生物污染,也需进行严格的检测以确认血清成品中无细菌、真菌、支原体、病毒等的污染。


据行业标准,细菌和真菌采用的是薄膜过滤法进行验证其存在与否。支原体可用PCR法或是培养法进行检测。依据9CFR的通则要求,病毒检测(牛病毒性腹泻病毒、牛腺病毒、牛细小病毒等)采用的是荧光抗体法进行检。 



物种鉴定测试(蛋白电泳测试)



为了确保血清中没有非牛物质的存在,保证产品的完整性,应对牛血清进行种间和种内鉴定实验。


通常情况下,可使用蛋白凝胶电泳来进行验证。通过电泳,血清蛋白通常分成多达六个部分,即白蛋白、α1、α2、β1、β2 和γ 球蛋白,每一种都有特定的电泳图谱可以进行对照比对。


其它方法包括辐射状免疫扩散法(Radial Immunodiffusion, RID)与欧氏(Ouchterlony)双扩散法等,可以定性或者定量检测血清中免疫球蛋白G的含量。



血红蛋白(Hemoglobin)含量测试



血红蛋白是红细胞内运输氧的特殊蛋白质,是使血液呈红色的蛋白,由珠蛋白和血红素组成,其珠蛋白部分是由两对不同的珠蛋白链(α链和β链)组成的四聚体。


红血球脆弱并容易破裂,会将血红蛋白释放到血清中。粗暴处理所获得的血液,不良的温度控制或延迟处理将提高血清中的血红蛋白含量。快速、小心处理得到的血液,通常血红蛋白的含量较低,其产出的血清品质也更佳。


一般情况下,先进的心脏穿刺取血技术可降低破碎红细胞的风险,降低血清中血红蛋白的含量。通常,血红蛋白含量使用分光光度法进行测量。



免疫球蛋白检测



对于胎牛血清而言,由于采血时牛尚未接触外界,其血液中通常不含IgM,IgG的含量也较低。对细胞培养的干扰和损害小。


免疫球蛋白通常采用单向免疫扩散(Single Radial Immunodiffusion, SRID)法进行检测。


内毒素含量检测



血清中的内毒素会影响超过三十种以上之生物活性,如:巨噬细胞的活化、促进有丝分裂、诱导干扰素和群落刺激因子等。同时,内毒素也可能会因为启动补体活性而产生细胞毒性。


因而,内毒素的含量较低的血清通常品质更佳。


检测内毒素最常使用的方法为鲎的变形血球萃取物凝集的半定量凝胶法和定量动力显色法。


渗透压检测



渗透压测试是用来评估血清中所含电解质的浓度。一些化学物质如钠、氯、碳酸氢根、钾、蛋白质和葡萄糖等均会影响血清渗透压。


血清的渗透压一般使用冰点法测试,每个样品的渗透压以血清中水含量为基准计算,单位以mOsmol/kg水表示。



蛋白质总含量检测



测量血清中蛋白质总含量可确认动物的年龄及符合产品的规格。不同的细胞培养对蛋白质含量的要求也不同,可接受的含量应该根据最终使用者的用途来评估。


一般使用双缩脲法(Biuret)及考马氏亮蓝法(Bradford)对蛋白质的含量进行测定。



细胞生长测试



血液的成分含量复杂,不同批次之间的差异性也很大,为了检测不同批次血清对特定体外细胞株生长的效力,所以要对每一批次的血清进行细胞培养测试。


进行细胞培养测试可通过数次的传代培养去监测血清对细胞生长的促进作用,同时也可监测血清对细胞的毒性作用或是对细胞的形态影响。


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